Rekombinante Expression von Proteasen in Pichia pastoris

Abstract

Die vorliegende Masterarbeit beschäftigt sich mit der rekombinanten Expression
verschiedener Proteasen in Pichia pastoris. Dazu musste das S3-Proteasegen aus dem
Transportvektor in den pPICZB-Expressionsvektor überführt werden. Nach der
Herstellung von E. coli Transformanten und Anreicherung der Plasmid-DNA erfolgte die
Elektroporation in Pichia pastoris. Für positive S3-Transformanten sowie für bereits
vorhandene Transformanten der Proteasegene S4 und S6 wurde die Enzymproduktion
im Dot-Blot gescreent. Ausgewählte Klone wurden dann im Schüttelkolben
fermentiert. Die S3-Überstände zeigten Aktivitätswerte bis zu 0,019 U/ml. Im Western
Blot konnten alle drei Proteasen hinsichtlich Größe identifiziert werden. Die
Schüttelkolbenüberstände der S3- und S6-Protease wurden mittels Immobilisierter
Metallionen-Affinitätschromatographie aufgereinigt. Dabei wurde die Aufreinigung
hinsichtlich mehrerer Parameter variiert.

Datum der Bewilligung	2018
Originalsprache	Englisch
Gradverleihende Hochschule	Fachhochschule Wiener Neustadt GmbH
Betreuer/-in	Agnes Grünfelder (Betreuer)