Rekombinante Expression diverser Proteasen in Pichia pastoris

Abstract

In dieser Masterarbeit geht es um die rekombinante Expression diverser Proteasen in
Pichia pastoris. Dazu wurden zunächst E. coli Transformanten mit den bereits im
Vektor pPICZαB vorliegenden Inserts hergestellt um ausreichend Plasmid-DNA
herstellen zu können. Anschließend erfolgte die Elektroporation in Pichia pastoris. Es
konnten somit Pichia Transformanten für die Proteasen G5, S4, S5 und S6 hergestellt
werden, welche im Dot-Blot positiv auf Enzymproduktion gescreent werden konnten.
Eine Charakterisierung erfolgte auch über SDS-PAGE mit Coomassie Färbung und
Western Blot. Ausgewählte Produktionsstämme für die Proteasen G5 und S5 wurden
fermentiert und die Proteasen über IMAC aufgereinigt. Abschließend wurden
Aktivitätsassays durchgeführt, wobei im Azocaseinassay 3∙10-6 U/ng für G5 und 18∙10-6
U/ng für S5 erreicht werden konnten.

Datum der Bewilligung	2017
Originalsprache	Deutsch
Gradverleihende Hochschule	Fachhochschule Wiener Neustadt GmbH
Betreuer/-in	Agnes Grünfelder (Betreuer)